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外来文库测序
外来文库测序服务专为已完成样品前处理并自行构建好文库的客户提供。通过使用最先进的高通量测序技术，能够在短时间内生成高质量的测序数据，确保研究项目能够及时获得可靠的结果。
产品优势
- 适配多种类型的文库，并且其他平台的文库也可以经过转化DNBSEQ™ 平台上进行测序，同时保证原始的文库序列不发生改变。
- 避免错误累计，DNBSEQ™ 平台基于滚环扩增（Rolling Circle Amplification, RCA）的线性扩增技术，能够大大提高测序的准确性。
- DUP率低，独特的测序策略来提高数据质量和减少重复序列（DUP）的发生率
- InDel 检测更灵敏，基于RCA的线性扩增技术能够降低插入和缺失测序的错误率
- 无Index hopping 担忧，DNBSEQ™ 平台测序的众多拷贝来源于一个模板，所以由Index hopping带来的错误不会累积
- 测序平台经验丰富，文章发表数量共计9,000+篇，涉及物种丰富的物种类型和不同专业领域
技术原理
华大基因测序仪采用先进的DNBSEQ™ 核心技术，通过仪器气液系统先将DNA纳米球 (DNA nanoball, DNB) 泵入到规则阵列载片 (Patterned Array) 并加以固定，然后再将测序模板及测序试剂泵入。泵入后的测序模板与载片上的DNB的接头互补杂交，在DNA聚合酶的催化下，测序模板与测序试剂中的带荧光标记的探针相结合。接下来，通过激发荧光基团发光，不同荧光基团所发射的光信号被仪器相机采集，经过处理后可转换成数字信号，传输到计算机进行再次处理，最终获取待测样本的碱基序列信息。
图１DNBSEQ测序流程图
所有跟DNB相关的测序技术都属于DNBSEQ™。DNBSEQ™测序技术主要包括: DNA单链环化和DNB制备 (Make DNB)，规则阵列 (Patterned Array)，DNB加载 (LoadDNB)，cPAS (combinatorial Probe Anchor Synthesis，联合探针锚定聚合测序法)，双端测序技术 (Pair-end)，以及配套的流体和光学检测技术、碱基识别 (Basecall) 算法等。
与其他测序技术相比，DNBSEQTM测序技术具有滚环复制扩增带来的错误累积低和规则阵列载片带来的信号密度高等原理性优势，大幅提高了测序准确性；而且，基于DNBSEQTM测序平台的产出数据重复序列率低 (Dup率低)、有效数据利用率高、标签跳跃（Index Hopping）少，能有效降低“张冠李戴”的情况。此外，结合PCR free等建库方法，DNBSEQTM测序平台拥有更好的SNP和InDel准确性。
技术参数
表格1 SEQ 表格 \* ARABIC 1 测序平台及对应产量
* 参考产量仅供参考。实际执行过程中，根据不同的文库类型和文库质量产量可能会有较大幅度的波动。不承诺每个样品的数据产出及质量。
项目流程
文库结构
1. DNBSEQ™ 平台文库：文库符合 MGI 标准结构（BGI 通用结构或 MGI 双 index 结构）；
2. 其他平台文库：Illumina 标准结构（TruSeq 结构 或 Nextera 结构）、Illumina TruSeq Read 1-Nextera Read 2、Illumina Nextera Read 1-TruSeq Read 2、Illumina TruSeq Small RNA、或 NEB Small RNA。
文库片段分布
PE100 文库片段范围 250-550bp；PE150 文库片段范围 300-550bp；文库片段主峰长度不超过 550bp；PE250/PE300 文库片段范围 450-750bp；单一主峰、无明显拖尾峰、无杂峰、无接头、无引物二聚体污染。
Barcode/index要求
1. Barcode/index碱基要求：同lane pooling文库barcode/index碱基平衡，即每个cycle A、T、C、G均有且占比在 8% - 62.5%的范围内。若barcode/index不平衡则不能保证单lane barcode/index拆分率；
2. 同 lane pooling 文库中 barcode/index 长度需相同。不同 barcode/index 碱基长度的样本混合测序，需评估。
样品准备
1. 样品质检：合作伙伴需提供 Qubit、NanoDrop、BMG、AGE、Agilent片段分析仪 或 Caliper LabChip Touch 中一种或多种形式的样品分析结果，如质检方法为最后两种，需附上胶图或峰图以供参考。
2. 送样体积：BGI 只接收 1.5 mL EP 管，要求每管样品体积不低于最低送样体积要求，根据实验要求，如果样品体积小于 15 μL，BGI 可能会在检测之前稀释原始样品。
3. 样品前评估：送样前准确填写《客户自建库信息评估单》并进行评估。
4. 样品标识一致性：样本名称请准确清楚标记于样本管上，并保证与《客户自建库信息评估单》及《客户自建库样品送检单》一致。
5. 样品质量标准：样品质量以 BGI 的质检结论为准，望合作伙伴理解，检测结果可能会由于检测地点， 仪器设备和操作者等不同造成固有差异。
* 更多内容见华大官方文档《DNBSEQ平台外来文库送样建议》。
Q：Illumina平台文库及10x Genomics文库能在DNBSEQ™平台上测序吗？
A: 可以上机，具体支持的文库类型详见“送样建议”。
Q：Pooling文库上机，有哪些注意事项？
A：为保证最佳的测序质量，Barcode碱基平衡是最理想的状况，每个cycle A、T、C、G四种碱基都要有，且占比在8% - 62.5%，可允许个别cycle不平衡。欢迎您在咨询或文库评估之后，根据我们的建议建库。
Q：文库需要自行pooling吗？
A：您可自行pooling，也可将子文库送到华大，由我们pooling。
Q：DNBSEQ平台文库如何构建？
A：可选择购买华大智造试剂盒或按照提供的信息自行建库。
Q：文库评估需要提供哪些信息？
A：需要提供的信息包括：文库两端接头序列、文库类型及浓度、文库对应的Barcode序列、文库插入片段长度、插入片段是否随机、文库结构中特殊序列的具体序列信息及位置等。
